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氯丙嗪快速檢測試劑盒使用說明書

更新時間：2019-06-04　點擊量：2103

氯丙嗪快速檢測試劑盒

使用說明書

【測定原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA法檢測尿樣和組織等樣本中的氯丙嗪，在微孔條上預包被偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行，樣本中的氯丙嗪和微孔條上預包被偶聯抗原競爭標記有辣根過氧化酶的抗氯丙嗪抗體，通過洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的氯丙嗪含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出氯丙嗪含量。

【試劑盒技術指標】

規格：96孔/盒

靈敏度： 1ppb

檢測時間： 45min

樣本檢測下限：

尿液………………………………… 3ppb

組織………………………………… 2ppb

飼料 ……………………………… 1ppb

交叉反應率：

氯丙嗪（Salbutamol ）……………… 100%

樣本回收率：

尿樣 ……………………… 85%±10%

組織 ……………………… 85%±15%

飼料 ……………………… 85%±15%

【試劑盒組成】

微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
氯丙嗪標準品溶液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
高濃度標準品：×1瓶：（1ml/瓶） 1ppm
酶標記物 7ml……………………… 紅色帽
抗體工作液 7ml………………………… 綠色帽
底物A液 7ml …………………… 棕色帽
底物B液 7ml …………………… 黑色帽
終止液 7ml ………………… 黃色帽
2X濃縮復溶液50 ml ……………………藍色帽
20X濃縮洗滌液40 ml …………………白色帽

【 所用儀器、試劑】

具備的儀器：微孔酶標儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質器、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管微量移液器：單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl

試劑：乙腈、甲醇、正己烷、無水硫酸鈉

【實驗前溶液配制】

配液1、將30ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

配液2：1X樣本復溶液

將2X濃縮復溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復溶液+1份去離子水）用于樣本的復溶。

【樣本前處理步驟】

樣本處理前須知

處理任何樣本時，都必須注意：

（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

（2）實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。

（a）尿樣本的處理方法

取50µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。

由于尿液陰性樣本可能會產生背景干擾（在某些情況下干擾數值在標準2到3之間），所以推薦標準3即0.3ppb作為尿液陽性結果的CUT OFF判斷值。

樣本稀釋倍數：1

（b）組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法

稱取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min；

1、取上清液4ml，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；

肉樣本：

加入1ml 去樣本的復溶混合振蕩30s，取50µl用于分析。

肉樣本稀釋倍數：1

肝臟樣本：

加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 樣本的復溶混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50µl下層與50µl樣本的復溶混勻；取50µl用于分析。

肝樣本稀釋倍數：2

（c）飼料樣品的處理方法

1、稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml甲醇，再加入5g無水硫酸鈉，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min；

2、吸出離心后的上清液2ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml 樣本復溶溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min

3、取50µl下層與50µl去樣本的復溶混勻；取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數：10

【酶標免疫分析程序】

操作步驟：

1．將所需試劑從冷藏環境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2．按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3．編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

4．加標準品/樣本50µl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環境反應30min。

5．取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡用干凈的槍頭刺破）。

6．顯色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環境避光顯色15min。

7．測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內讀完數據），測定吸光度值（OD值）。

【結果判定】

結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯丙嗪的含量成負相關.

1、粗略判定：

用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含氯丙嗪濃度范圍（ng/ml）。假設樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.892；1ppb為1.501；3ppb為1.175； 9ppb為0.751；27ppb為0.421； 81ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣品2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯丙嗪實際濃度。